(Durchflusszytometrie, FCM) ist ein Zellanalysator, der die Fluoreszenzintensität von gefärbten Zellmarkern misst. Es handelt sich um eine High-Tech-Technologie, die auf der Analyse und Sortierung einzelner Zellen entwickelt wurde. Es kann schnell die Größe, interne Struktur, DNA, RNA, Proteine, Antigene und andere physikalische oder chemische Eigenschaften von Zellen messen und klassifizieren und auf der Sammlung dieser Klassifizierungen basieren.
Der Durchflusszytometer besteht hauptsächlich aus den folgenden fünf Teilen:
1 Durchflusskammer- und Fluidiksystem
2 Laserlichtquelle und Strahlformungssystem
3 Optisches System
4 Elektronik-, Speicher-, Anzeige- und Analyse -System
5 Zellsortiersystem
Unter ihnen ist die Laseranregung in der Laserlichtquelle und im Strahlformsystem die Hauptmessung der Fluoreszenzsignale in der Durchflusszytometrie. Die Intensität des Anregungslichts und die Belichtungszeit hängen mit der Intensität des Fluoreszenzsignals zusammen. Laser ist eine kohärente Lichtquelle, die ein Wellenlänge, hohe Intensität und Hochstabilitätserbeleuchtung liefern kann. Es ist die ideale Anregungslichtquelle, um diese Anforderungen zu erfüllen.
Es gibt zwei zylindrische Linsen zwischen der Laserquelle und der Durchflusskammer. Diese Linsen fokussieren einen Laserstrahl mit einem kreisförmigen Querschnitt, der von der Laserquelle in einen elliptischen Strahl mit einem kleineren Querschnitt (22 μm × 66 μm) emittiert wurde. Die Laserenergie innerhalb dieses elliptischen Strahls ist gemäß einer Normalverteilung verteilt, um eine konsistente Beleuchtungsintensität für Zellen zu gewährleisten, die durch den Lasererkennungsbereich fließen. Andererseits besteht das optische System aus mehreren Sätzen von Linsen, Pinholen und Filtern, die grob in zwei Gruppen unterteilt werden können: stromaufwärts und stromabwärts der Durchflusskammer.
Das optische System vor der Durchflusskammer besteht aus einer Linse und einem Lochloch. Die Hauptfunktion des Objektivs und des Lochlochs (normalerweise zwei Objektive und ein Loch) besteht darin, den Laserstrahl mit einem kreisförmigen Querschnitt zu konzentrieren, der von der Laserquelle in einen elliptischen Strahl mit einem kleineren Querschnitt emittiert wird. Dies verteilt die Laserenergie nach einer Normalverteilung, um eine konsistente Beleuchtungsintensität für Zellen im gesamten Lasererkennungsbereich zu gewährleisten und die Störungen aus streunenden Licht zu minimieren.
Es gibt drei Haupttypen von Filtern:
1: Langpassfilter (LPF) - Ermöglicht nur Licht mit Wellenlängen, die höher als ein spezifischer Wert durchlaufen.
2: Kurzpassfilter (SPF) - Ermöglicht nur Licht mit Wellenlängen unter einem bestimmten Wert.
3: Bandpassfilter (BPF) - Ermöglicht nur das Licht in einem bestimmten Wellenlängenbereich.
Verschiedene Kombinationen von Filtern können Fluoreszenzsignale bei unterschiedlichen Wellenlängen auf einzelne Photomultiplikatorröhrchen (PMTs) leiten. Beispielsweise sind Filter zur Erkennung von grünem Fluoreszenz (FITC) vor PMT LPF550 und BPF525. Die Filter, die zur Erkennung orange-roter Fluoreszenz (PE) vor dem PMT verwendet werden, sind LPF600 und BPF575. Die Filter zum Nachweis der roten Fluoreszenz (CY5) vor dem PMT sind LPF650 und BPF675.
Durchflusszytometrie wird hauptsächlich für die Zellsortierung verwendet. Mit der Weiterentwicklung der Computertechnologie, der Entwicklung der Immunologie und der Erfindung der monoklonalen Antikörpertechnologie, ihren Anwendungen in Biologie, Medizin, Apotheke und anderen Bereichen werden immer weit verbreitet. Diese Anwendungen umfassen die Zelldynamikanalyse, die Zellapoptose, die Zellentypisierung, die Tumordiagnose, die Wirksamkeitsanalyse von Arzneimitteln usw.
Postzeit: Sep-21-2023
